Testul PCR – ce este si pentru ce se utilizeaza

Testul PCR reprezinta o metoda diagnostica extrem de utila si de uz larg in practica medicala. Principiul investigatiei se bazeaza pe preluarea unei probe biologice in care se poate afla un patogen de interes sau o celula neoplazica si identificarea secventei ADN sau ARN corespunzatoare in proba respectiva. Datorita procentelor mari de sensibilitate si specificitate, acest test este de electie in procesul diagnostic al unei patologii infectioase sau neoplazice.

Afla, in cele ce urmeaza, ce este, mai exact, testul PCR, cum se recolteaza, ce semnifica un rezultat pozitiv si ce fel de pregatire este necesara in prealabil.

• Ce este testul PCR si pentru ce se utilizeaza
• Cum se recolteaza testul PCR si ce pregatire este necesara in prealabil
• Ce presupune un test PCR
• Ce semnifica rezultatele testului PCR

Ce este testul PCR si pentru ce se utilizeaza

Denumirea de test PCR provine de la Polymerase Chain Reaction si semnifica metoda diagnostica de mare precizie prin care este izolat si identificat un patogen sau o celula neoplazica, in functie de prezenta unei secvente specifice de ADN sau ARN.

• ADN-ul – reprezinta materialul genetic al unui patogen sau celule neoplazice si detine toate informatiile necesare pentru supravietuirea si multiplicarea acestora;
• ARN-ul – reprezinta un alt tip de material genetic, intalnit in special in cazul virusurilor, care detine informatii despre sinteza proteinelor provenite de la ADN.

Cu toate ca testul PCR poate fi folosit pentru identificarea mai multor tipuri de microorganisme (de exemplu, bacterii) sau celule neoplazice, acest test diagnostic este cel mai util in infectiile virale, prin izolarea ADN-ului sau ARN-ului viral.

Motivul pentru care acest test diagnostic este de prima intentie este datorat acuratetii sale si abilitatii de a identifica ADN-ul sau ARN-ul viral chiar si in lipsa unei cantitati virale suficiente cat sa produca o simptomatologie vizibila sau sa fie depistata de catre alte investigatii. De asemenea, testul PCR este capabil sa identifice prezenta patogenului chiar si inaintea momentului producerii unui titru de anticorpi detectabil.

Exista mai multe tipuri de teste PCR:

• Test PCR simplu sau real time PCR – reprezinta metoda clasica de identificare a secventei de ADN;
• Test rtPCR – folosit in special in cazul unui virus ARN, unde este necesara copierea secventei ARN in una ADN inainte de inceperea testului propriu-zis;
• Test qPCR (cantitativ) – are particularitatea ca poate evidentia numarul de patogeni din proba.

Cum se recolteaza testul PCR si ce pregatire este necesara in prealabil

Testul PCR este, in general, o investigatie diagnostica ce presupune un grad mic de disconfort pentru pacienti, fiind destul de usor acceptata.

Primul pas este cel de prelevare a probei biologice, in general, din sange, saliva sau mucus, dar si dintr-o zona de tesut afectat.

• Pentru proba de sange – recoltarea este realizata de catre un asistent, prin inteparea unei vene superficiale si extragerea unei cantitati suficiente de sange in eprubeta;
• Pentru proba din saliva si/sau mucus – se foloseste un tampon de recoltare, cu ajutorul caruia se va lua o cantitate mica de saliva (de la nivelul cavitatii bucale sau din retrofaringe) sau de mucus (din nazofaringe sau de la nivelul zonei anterioare a foselor nazale).

Odata ce proba a fost recoltata, aceasta este trimisa cat mai curand posibil catre laborator, cu scopul izolarii si identificarii patogenului sau celulei neoplazice.

Nu exista o pregatire speciala din partea pacientului inainte de recoltarea unei probe pentru testul PCR, indiferent daca acesta se realizeaza din sange, saliva sau mucus. Principalele efecte adverse care pot aparea ca urmare a recoltarii probei pot fi de tipul:

• Echimozelor (vanatailor) – ca urmare a punctiei venoase efectuate pentru recoltarea sangelui;
• Tuse sau stranut – in timpul recoltarii cu tamponul la nivel nazal sau nazofaringian;
• Senzatia de varsatura – in timpul recoltarii cu tamponul la nivel retrofaringian.

Ce presupune un test PCR

Testul PCR se bazeaza pe principiul identificarii ADN-ului sau ARN-ului unui patogen sau, in unele cazuri, a unei celule potential neoplazice.

Pentru a se putea realiza un test PCR, este nevoie de o proba biologica din care pot fi izolate secvente ale ADN-ului sau ARN-ului (deci sa contina ADN sau ARN). Astfel, in functie de caz, se va folosi saliva, sange, mucus sau tesut afectat. Este important sa se preia proba tinand cont de locul in care s-ar putea afla patogenul (de exemplu, in cazul COVID-19, din spatiile retrofaringian si nazal).

Odata ce proba a fost recoltata, aceasta va fi transportata catre laborator. Prin intermediul unei masinarii numite termociclator si cu ajutorul unor enzime si componenti chimici specifici, secventa de ADN de interes, in cazul in care este prezenta, este amplificata de multe ori, rezultand, astfel, milioane de copii. Daca rezultatul este pozitiv, copiile din tubul de testare vor produce o lumina fluorescenta. Motivul pentru care se fac toate aceste copii este de a putea amplifica suficient de mult semnalul luminos si de a avea un rezultat cat mai clar.

In cazul in care proba de interes contine un patogen (in general, virus) ce prezinta ARN in loc de ADN, este necesar ca, inaintea inceperii procesului de producere a copiilor, acel ARN sa fie transpus in ADN. Acest proces poarta denumirea de rtPCR (reverse transcriptase PCR) si nu trebuie confundat cu RT-PCR (real time PCR).

Ce semnifica rezultatele testului PCR

In urma efectuarii unui test PCR, exista trei rezultate posibile care pot fi comunicate:

1. Rezultat pozitiv (detectabil);
2. Rezultat negativ (nedetectabil);
3. Rezultat neconcludent (indeterminat).

Rezultat pozitiv

Rezultatul pozitiv inseamna ca este o foarte mare probabilitate ca patogenul de interes sa fie prezent, intrucat secventa de ADN identificata si multiplicata a putut fi observata.

Rezultat negativ

De cele mai multe ori, un rezultat negativ inseamna ca secventa de ADN nu a putut fi identificata, fapt sustinut si de sensibilitatea crescuta a testului.

Totusi, in cazuri rare, se poate ascunde un rezultat fals-negativ, care poate interveni ca urmare a unei recoltari incorecte (proba nu contine patogenul), timpurii (inca nu au fost dezvoltate simptome, intrucat infectia este recenta) sau tarzii (a fost prezenta infectia anterior, cu minimum o saptamana inainte de test si sistemul imun a luptat cu infectia si a eliminat patogenul).

Rezultat neconcludent

Un rezultat neconcludent inseamna ca testul nu a putut fi realizat corect si nu a detectat prezenta sau absenta patogenului. In aceasta situatie, este intotdeauna necesar sa fie prelevata o noua proba.

Astfel, testul PCR este o metoda de izolare si identificare a unui patogen sau a unei celule neoplazice de interes, care ofera un grad mare de acuratete si faciliteaza procesul diagnostic. In special in perioada pandemiei de COVID-19, acest test s-a dovedit a fi extrem de util si a confirmat importanta pe care o detine in practica medicala.

Bibliografie:

Testul PCR si COVID-19 https://my.clevelandclinic.org/health/diagnostics/21462-covid-19-and-pcr-testing#:~:text=PCR%20means%20polymerase%20chain%20reaction,you%20are%20no%20longer%20infected.

Testele PCR https://medlineplus.gov/lab-tests/pcr-tests/

Testul qPCR https://lexagene.com/what-is-pcr-testing/

Tipuri de teste PCR https://www.enzolifesciences.com/science-center/technotes/2017/march/what-are-the-differences-between-pcr-rt-pcr-qpcr-and-rt-qpcr?/